一、基因信息

Dcaf8为小鼠的DDB1 and CUL4 associated factor 8基因，Ensembl version数据库号为ENSMUSG00000026554.15。

1.1 Targeting Strategy

济世金编运用专业技术知识、经验，根据客户的具体要求在Dcaf8的第4、10外显子上设计的sgRNAs（如图1），并将这些sgRNAs和Cas9 mRNA显微注射到小鼠受精卵内，最后产生Dcaf8基因敲除小鼠。

图1.

1.2 技术路线：

针对Dcaf8基因，设计并克隆sgRNA表达载体；体外转录Cas9 mRNA和sgRNA；受精卵注射，移植。注射用的受精卵为C57BL/6N背景；通过PCR和测序对出生的小鼠进行基因鉴定，得到F0代敲除小鼠。

二、基因型鉴定报告

2.1引物信息：

Primer 

F: TTCCACTTAGAAGTTCCCCCAG

R: CACGGGAAACAGGCCAGATA

PCR鉴定策略（图2）：野生型（wt）产物理论长度约15.8k bp。

图2.

2.2 PCR反应体系

2.3 PCR反应条件（touch down）

2.4 电泳图

图3：M：DNA Marker （自下而上：100bp, 200bp, 500bp, 750bp,1000bp,2000bp）1-6：鼠尾DNA。+：基因敲除阳性鼠。

2.5 阳性小鼠PCR产物测序报告

1#阳性鼠

4#阳性鼠

6#阳性鼠

（详情附件中）

三、 分析与结论

通过PCR及其产物测序的方法鉴定小鼠基因型，本项目共产生3只Dcaf8基因敲除阳性鼠（1#，4#，6#）。